解決的方案有:
1.HCV強(qiáng)陽(yáng)性血清1ml,先配成1:10用，條切窄些，上樣前把樣品墊切去些，省著點(diǎn)用。
上次你們寄來(lái)的樣品1:10時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)前帶反應(yīng)，顯色時(shí)間及顯色強(qiáng)度均不如1:100，所以先從1:10開(kāi)始調(diào)試。
及至1:10時(shí)前帶反應(yīng)消除，配成1:4檢測(cè)，只要1:4時(shí)不出現(xiàn)明顯的前帶反應(yīng)，原液檢測(cè)亦無(wú)問(wèn)題。
2.SPE試劑:
用于解決前帶反應(yīng)，可用于HCV與HIV膠體金紙條，均效果明顯，現(xiàn)濃度為0.4M，室溫保存。
用量: 對(duì)于4μl金/條，加至5mM即可，計(jì)算一下每條噴金的量，如果2μl金/條，則調(diào)制10mM即可，以此類推。
長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)病人使用的標(biāo)準(zhǔn)治療方法是持續(xù)混合使用長(zhǎng)效干擾素(peginterferon-?8?4)和利巴韋林(ribavirin)。但這種治 療方法療效有限、周期長(zhǎng)、費(fèi)用昂貴，并常伴有毒副作用。最近以標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)用新上市的NS3/4A抑制劑Telaprevir和Boceprevir等，雖 然可以提高治療效果，但抗藥性突變病毒的產(chǎn)生一直是一個(gè)潛在的問(wèn)題。目前國(guó)際上抗RNA病毒治療的發(fā)展方向是建立一種基于多種藥物靶點(diǎn)的聯(lián)合療法，因此迫 切需要開(kāi)發(fā)多個(gè)作用靶點(diǎn)，尋找更有效的治療方法和干預(yù)手段。
p7是HCV基因表達(dá)的唯一的離子通道蛋白，對(duì)病毒顆粒的組裝和成熟、病毒顆粒的釋放必不可少，突變和完全刪除p7會(huì)導(dǎo)致HCV病毒不能產(chǎn)生感 染性。離子通道蛋白是一類在許多病毒中廣泛存在的蛋白質(zhì)，對(duì)于病毒的生活周期產(chǎn)生重要影響，被廣泛作為潛在藥物靶點(diǎn)加以研究，例如流感病毒的M2蛋白和艾 滋病病毒的Vpu蛋白。但是以p7為靶點(diǎn)的抗HCV藥物研究卻進(jìn)展緩慢，主要原因是由于p7是一個(gè)跨膜蛋白，形成多聚體陽(yáng)離子通道后，結(jié)構(gòu)復(fù)雜、構(gòu)象靈 活，給結(jié)構(gòu)研究、尤其是蛋白質(zhì)結(jié)晶帶來(lái)極大困難，因此，長(zhǎng)期以來(lái)缺乏p7離子通道的三維結(jié)構(gòu)及其與小分子化合物結(jié)合的作用機(jī)理。
在無(wú)法得到蛋白質(zhì)晶體的情況下，周界文研究員和歐陽(yáng)波博士（文章第一作者）建立了一種基于核磁共振的方法，最終解析了此病毒通道的結(jié)構(gòu)。此通道 結(jié)構(gòu)非常特異，形成花瓣形的六聚體結(jié)構(gòu)，是目前使用核磁共振技術(shù)解析出的最大的離子通道結(jié)構(gòu)。由結(jié)構(gòu)帶來(lái)的啟發(fā)，周界文課題組與上海巴斯德所、中科院上海 生化細(xì)胞所孫兵課題組合作，首次鑒定了金剛烷胺類化合物對(duì)p7的離子通道活性發(fā)揮抑制作用的結(jié)合位點(diǎn)，并通過(guò)一系列的功能測(cè)試，揭示了p7通道離子轉(zhuǎn)運(yùn)和 藥物抑制的機(jī)理。
通過(guò)對(duì)這些病毒離子通道結(jié)構(gòu)和機(jī)制方面的理解，科學(xué)家期望在不久的將來(lái)可以研制出新一代抗丙型肝炎病毒的治療手段。
本課題研究組負(fù)責(zé)人周界文研究員，現(xiàn)為美國(guó)哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授、中組部“千人計(jì)劃”引進(jìn)人才、中科院上海生化與細(xì)胞所/國(guó)家蛋白質(zhì)科學(xué)中心?上 海（籌）研究員。其課題組的研究專長(zhǎng)是用生物物理方法測(cè)膜蛋白結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)特性，理解它們的功能與機(jī)制，尤其在病毒蛋白質(zhì)研究方面具有很深厚的積累。在此之 前，也是這個(gè)課題組首次解析了禽流感病毒離子通道的結(jié)構(gòu)與耐藥機(jī)制（成果發(fā)表在Nature，PNAS等頂尖學(xué)術(shù)刊物上）。
]]>在乙肝五項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中，HBcAb的陽(yáng)性滴度遠(yuǎn)高于HBeAb，陽(yáng)性率也遠(yuǎn)高于HBeAb，當(dāng)血清中存在單獨(dú)高滴度的HBcAb時(shí)，由于HBeAg中HBcAg的存在，所形成的HBcAb-HBcAg復(fù)合物對(duì)HBeAg-HRP-HBeAb的結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)生占位干擾，形成假性抑制，并給出假陽(yáng)性結(jié)果。
解決的方案有兩種:
選用高度特異性的包被HBeAb，即針對(duì)構(gòu)象表位的單抗，但對(duì)于試劑生產(chǎn)廠商來(lái)說(shuō)，如何判斷某一HBeAb單抗是否為構(gòu)象表位十分困難;
選用高度特異性的HBeAg，即在HBeAg工作濃度范圍內(nèi)，其所含有的HBcAg越少越好。
鉑萊瑞HBeAg中的HBcAg極低，對(duì)HBeAb的檢測(cè)已不構(gòu)成干擾。
鉑萊瑞HBeAg與其他市售HBeAg的檢測(cè)數(shù)據(jù):
樣本 HBeAg HBcAg HBeAg /HBcAg
市售HBeAg 1# 1.56 2.24 0.7
市售HBeAg 2# 1.56 1.43 0.1
鉑萊瑞HBeAg 1.61 0.12 13.4